Ang mobile phase ay katumbas ng likidong bahagi ng dugo, at may iba't ibang bagay na dapat bigyang pansin habang ginagamit. Kabilang sa mga ito, mayroong ilang mga "pitfalls" na dapat bigyang pansin.
01. Sukatin ang pH ng mobile phase pagkatapos magdagdag ng organic solvent
Kung susukatin mo ang pH gamit ang isang organic additive, ang pH na makukuha mo ay magiging iba kaysa bago idagdag ang organic solvent. Gayunpaman, ang pinakamahalagang bagay ay ang pagiging pare-pareho. Kung palagi mong sinusukat ang pH pagkatapos idagdag ang organikong solvent, siguraduhing isaad ang iyong mga hakbang sa pamamaraang ginagamit mo upang ang iba ay sundin ang parehong paraan. Ang pamamaraang ito ay hindi 100% tumpak, ngunit hindi bababa sa ito ay panatilihing pare-pareho ang pamamaraan. Maaaring mas mahalaga ito kaysa sa pagkuha ng tumpak na halaga ng pH.
02. Walang ginamit na buffer
Ang layunin ng isang buffer ay upang makontrol ang pH at maiwasan ito sa pagbabago. Maraming iba pang paraan ang nagbabago sa pH ng mobile phase, na maaaring magdulot ng mga pagbabago sa oras ng pagpapanatili, peak shape, at peak response.
Ang formic acid, TFA, atbp. ay hindi mga buffer
03. Hindi gumagamit ng buffer sa loob ng normal na hanay ng pH
Ang bawat buffer ay may 2 pH unit range na lapad, kung saan ito ay nagbibigay ng pinakamahusay na pH stability. Ang mga buffer sa labas ng window na ito ay hindi magbibigay ng epektibong pagtutol sa mga pagbabago sa pH. Gumamit ng buffer sa tamang hanay, o pumili ng buffer na sumasaklaw sa hanay ng pH na kailangan mo.
04. Magdagdag ng buffer sa organikong solusyon
Ang paghahalo ng isang buffer solution sa isang organic na bahagi ay malamang na magiging sanhi ng buffer upang mamuo. Sa maraming mga kaso, kahit na naganap ang pag-ulan, mahirap pa rin itong matukoy. Tandaan na palaging idagdag ang organikong solusyon sa aqueous phase, na maaaring lubos na mabawasan ang pagkakataon ng buffer precipitation.
05. Paghaluin ang gradient ng konsentrasyon mula sa 0% gamit ang isang bomba
Ang mga pump na available ngayon ay maaaring epektibong paghaluin ang mga mobile phase at degas inline, ngunit hindi lahat ng gumagamit ng iyong pamamaraan ay magkakaroon ng mataas na kalidad na pump. Paghaluin ang A at B sa iisang solusyon at patakbuhin ito ng 100% inline.
Halimbawa, ang 950 ML ng organic na panimulang timpla ay maaaring ihanda sa pamamagitan ng paghahalo sa 50 ML ng tubig. Ang bentahe nito ay maaari nitong bawasan ang pagkakaiba-iba sa pagitan ng mga HPLC at bawasan ang posibilidad ng mga bula at pag-ulan sa system. Kapansin-pansin na ang ratio ng pinaghalong pump ay 95:5, na hindi nangangahulugan na ang pre-mixed retention time sa bote ay 95:5 din.
06. Hindi gumagamit ng tamang binagong acid (base) para mapalitan ang buffer
Gamitin lamang ang acid o base na bumubuo sa buffer salt na iyong ginagamit. Halimbawa, ang isang sodium phosphate buffer ay dapat ihanda na may lamang phosphoric acid o sodium hydroxide.
07. Hindi sinasabi ang lahat ng impormasyon tungkol sa buffer sa pamamaraan, tulad ng pagdaragdag ng 5g ngsodium phosphate sa 1000ml ng tubig.
Tinutukoy ng uri ng buffer ang hanay ng pH na maaaring i-buffer. Tinutukoy ng kinakailangang konsentrasyon ang lakas ng buffer. Ang 5 gramo o anhydrous sodium phosphate at 5 gramo ng monosodium phosphate monohydrate ay may iba't ibang lakas ng buffer.
08. Pagdaragdag ng mga organikong solvent bago suriin
Kung ang nakaraang paraan ay gumamit ng buffer solution para sa baseline B, at ang iyong pamamaraan ay gumagamit ng organic na solusyon para sa baseline B, sana ay maaayos mo ang buffer sa pump tubing at pump head.
09. Iangat ang bote at alisan ng laman ang huling patak
Malaki ang posibilidad na hindi ka magkakaroon ng sapat na mobile phase para makumpleto ang buong run at uusok ang iyong sample. Bukod sa posibilidad na masunog ang pump system at column, ang mobile phase ay ganap na sumingaw at ang mobile phase sa tuktok ng bote ay magbabago.
10. Gumamit ng ultrasonic degassing mobile phase
Ang pinakamahalagang punto ay upang matiyak na ang lahat ng mga buffer salt ay natunaw, ngunit ito ang pinakamasamang paraan upang mag-degas at mabilis na magpapainit sa mobile phase, na nagiging sanhi ng pag-evaporate ng mga organic na bahagi. Upang i-save ang hindi kinakailangang problema sa ibang pagkakataon, maglaan ng limang minuto upang i-vacuum ang filter ng iyong mobile phase.
Oras ng post: Aug-27-2024